РНГА

Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/06287 от 15.08.2011 г.

Диагностикум эритроцитарный коревой антигенный сухой для реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) представляет собой 3 % акролеинизированные, танизированные бараньи эритроциты, сенсибилизированные дезинтегрированным коревым антигеном.

В состав набора входит:

  • диагностикум эритроцитарный коревой (КЭД) антигенный сухой 3 % — 5 фл. по 2 мл;
  • сыворотка кроличья нормальная (НКС) сухая 10 % — 5 фл. по 2 мл;
  • эритроциты барана, акролеинизированные или формалинизированные несенсибилизированные (суспензия 30 %), − 1 фл. 3 мл;
  • иммуноглобулин человека нормальный жидкий — положительный контрольный образец коревых антител с титром антител 1:320 – 1:1280, соответствующим 50 МЕ/мл, − 1 амп. 1,5 мл.

Указанные реагенты упакованы в картонную коробку вместе с инструкцией по применению.

Один набор рассчитан для исследования 90 сывороток, не считая контролей.

Назначение

Выявление антител к вирусу кори в сыворотках крови людей и в препаратах иммуноглобулина человека.

Способ применения

Диагностикум применяют в реакции пассивной гемагглютинации.

Для постановки реакции дополнительно требуются следующие материалы и оборудование:

  • дистиллированная вода;
  • раствор натрия хлорида, 0,9 %, рН 6,6 — 7,2;
  • спирт этиловый ректифицированный технический;
  • пипетки одноканальные для подачи жидкостей на 5 — 40 мкл, 40 — 200 мкл, 200 — 1000 мкл и 1000 — 5000 мкл;
  • пипетки 8- или 12-канальные для подачи жидкостей на 5 — 40 мкл, 40 — 200 мкл;
  • наконечники полипропиленовые на 5 — 200 мкл, 200 — 1000 мкл и 1000 — 5000 мкл;
  • пробирки центрифужные полипропиленовые или стеклянные вместимостью 10,0 мл;
  • мерные стаканы вместимостью 50,0 – 100,0 мл;
  • ванночки для реагентов или стеклянные чашки Петри;
  • планшеты полимерные для иммунологических реакций однократного применения с лунками вместимостью 0,20 — 0,25 мл и U-образным дном;
  • спиртовка СЛ−1 или СЛ−2;
  • бумага фильтровальная листовая для просушивания.

Приготовление растворов для постановки реакции пассивной гемагглютинации

Приготовление рабочего 1 % раствора НКС

Для разведения диагностикума, испытуемых сывороток и иммуноглобулина человека используют 1 % раствор НКС.

Во флакон с НКС вносят 2,0 мл дистиллированной воды и выдерживают при температуре от 16 до 25 °С в течение 1 мин. — получают 2,0 мл 10 % НКС. Затем 10 % НКС разводят в 10 раз 0,9 % раствором натрия хлорида — получают 1 % раствор НКС. Например, к 18,0 мл 0,9 % раствора натрия хлорида добавляют 2,0 мл 10 % раствора НКС.

Допускается хранение неиспользованного 10 % раствора НКС при температуре от минус 8 °С до минус 12 °С в течение 2 недель. 1 % раствор НКС хранят при температуре от 2 до 10 °С в течение 1 сут. Плохо растворившуюся сыворотку для реакции не используют.

Приготовление рабочей 1 % суспензии КЭД

Во флакон с диагностикумом добавляют 2,0 мл дистиллированной воды. В течение 1 мин. образуется гомогенная коричневая 3 % суспензия, которую оставляют при температуре от 16 до 25 °С на 2 ч для гидратации. При отстаивании образуется 2 слоя: прозрачная или слегка опалесцирующая надосадочная жидкость светло-желтого цвета и осадок коричневого цвета, разбивающийся при встряхивании. Для получения рабочей 1 % суспензии 3 % суспензию диагностикума разбавляют в 3 раза 1 % раствором НКС. Например, к 2,0 мл 3 % суспензии КЭД добавляют 4,0 мл 1 % раствора НКС.

Допускается хранение остатка 3 % суспензии диагностикума во флаконе при температуре от 2 до 10 °С в течение 24 ч.

1 % суспензия хранению не подлежит.

Приготовление 1 % суспензии акролеинизированных или формалинизированных эритроцитов барана

Для контроля испытуемых сывороток на полноту удаления бараньих изоагглютининов готовят 1 % суспензию эритроцитов из 30 % суспензии акролеинизированных или формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана (30 % суспензию акролеинизированных или формалинизированных эритроцитов перед применением отмыть 2 раза 0,9 % раствором натрия хлорида). После тщательного встряхивания к 0,1 мл 30 % суспензии эритроцитов добавляют 2,9 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Для контроля 90 сывороток необходимо не более 2,5 мл 1 % суспензии эритроцитов.

Допускается хранение остатка 1 % суспензии эритроцитов при температуре от 2 до 10 °С не более 7 суток.

Подготовка сывороток

Приготовление испытуемых сывороток

Испытуемые сыворотки должны быть прозрачными, светлыми, без признаков бактериального пророста и гемолиза. До серологического исследования их хранят при температуре от 2 до 10 °С или в замороженном состоянии при температуре минус 15 °С и ниже. Исследуемые сыворотки разводят 0,9 % раствором натрия хлорида 1:5 (к 0,1 мл нативной сыворотки добавляют 0,4 мл 0,9 % раствора натрия хлорида), прогревают при температуре 56 ± 1 °С в течение 1 ч и истощают 30 % суспензией акролеинизированных или формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана, которые перед этим тщательно встряхивают. 30 % суспензию эритроцитов добавляют в разведённую и прогретую сыворотку из расчёта 0,025 мл суспензии эритроцитов на 0,5 мл сыворотки, перемешивают и выдерживают при температуре 36 ± 1 °С в течение 1 ч или при температуре от 2 до 10 °С в течение 18 ч. Эритроциты осаждают центрифугированием при 1500 — 2000 об./мин. в течение 10 мин.

Приготовление положительного контроля – иммуноглобулина человека нормального

Иммуноглобулин человека нормальный разводят так же, как испытуемые сыворотки, — 1:5. Для этого из ампулы, содержащей иммуноглобулин, стерильно отбирают 0,1 мл и прибавляют к 0,4 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, получая, таким образом, рабочее разведение иммуноглобулина 1:5, которое используют в реакции без прогревания и обработки эритроцитами.

Неизрасходованный иммуноглобулин разливают стерильно по 0,1 мл и плотно закрывают пробками.

Допускается хранение разлитого по пробиркам иммуноглобулина при температуре от 2 до 10 °С не более 20 сут.

Постановка реакции

Для исследования 1 сыворотки используют 1 ряд лунок планшета.

В соответствии с количеством испытуемых сывороток в ряды планшета во все лунки многоканальной пипеткой вносят по 0,05 мл 1 % раствора НКС.

В первую и последнюю лунки каждого ряда вносят пипеткой по 0,05 мл подготовленных исследуемых сывороток и той же пипеткой, начиная с первой лунки, сыворотку перемешивают 5 раз и последовательно переносят во все лунки каждого ряда, кроме последней. Из последней лунки, в которой титровали сыворотку, удаляют 0,05 мл разведённой сыворотки. Разведение сывороток в первых и последних лунках получается, таким образом, 1:10.

Титрование иммуноглобулина человека нормального, входящего в комплект в качестве положительного контроля, производят точно так же, как испытуемых сывороток. Контроль иммуноглобулина ставят в 3-х параллельных рядах лунок планшета.

Во все лунки, кроме последней, каждого ряда многоканальной пипеткой вносят по 0,025 мл хорошо перемешанной 1 % суспензии диагностикума коревого эритроцитарного антигенного.

Обязателен контроль исследуемой сыворотки на полноту удаления бараньих изоагглютининов. Для этого в последние лунки каждого ряда, где содержатся по 0,05 мл исследуемой обработанной и разведенной 1:10 сыворотки, вносят по 0,025 мл хорошо перемешанной 1 % суспензии эритроцитов барана, приготовленной из 30 % суспензии формалинизированных или акролеинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана.

Обязателен контроль КЭД на отсутствие его спонтанной агглютинации в 1 % растворе НКС. Для этого в 4 лунки планшета вносят по 0,05 мл 1 % НКС и 0,025 мл 1 % суспензии диагностикума.

Обязателен контроль акролеинизированных или формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана на отсутствие неспецифической агглютинации в 1 % растворе НКС. Для этого в 4 лунки вносят по 0,05 мл 1 % НКС и 0,025 мл 1 % суспензии несенсибилизированных эритроцитов.

Планшет тщательно встряхивают и оставляют при температуре от 16 до 25 °С на 2 ч до полного оседания эритроцитов в контроле.

Учет результатов проводят по условной шкале четырех крестов:

В последних лунках каждого ряда (контроль сыворотки), где добавлена 1 % суспензия формалинизированных или акролеинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана, не должно быть агглютинации. При наличии агглютинации данная сыворотка должна быть повторно истощена.

В контрольных лунках с коревым эритроцитарным диагностикумом (контроль КЭД) в 1 % растворе НКС не должно быть агглютинации.

В контрольных лунках с акролеинизированными или формалинизированными несенсибилизированными эритроцитами в 1 % растворе НКС (контроль эритроцитов) не должно быть агглютинации.

Титром сыворотки или иммуноглобулина считают то последнее разведение, которое вызывает агглютинацию нагруженных коревым антигеном эритроцитов на два креста (++).

Сыворотки с титром 1:10 и выше расценивают как положительные.

При ретроспективной диагностике подтверждённым считают диагноз кори при наличии четырёхкратного и более нарастания титра антител при титровании парных сывороток: 1-ая из которых получена не позднее 3-го дня с момента появления сыпи, а 2-ая — через 3 недели после получения первой.

Титр коревых антител в иммуноглобулине человека нормальном (положительный контрольный образец) в РПГА должен соответствовать указанному на коробке комплекта с диагностикумом и выражен величиной разведения в МЕ/мл.

Титр коммерческих серий препарата иммуноглобулина устанавливают в Международных Единицах (МЕ).

Расчёт титра коревых антител в препаратах иммуноглобулинов в МЕ производят по следующей формуле:

Х = (а*с)/в, где:

Х — титр коревых антител в испытуемом иммуноглобулине в МЕ;
а — титр коревых антител в иммуноглобулине – положительном контрольном образце коревых антител в МЕ, указанный на этикетке коробки;
в — титр коревых антител в иммуноглобулине – положительном контрольном образце коревых антител, выраженный величиной обратной разведению, полученный в данном опыте;
с — титр коревых антител в испытуемом иммуноглобулине, выраженный величиной обратной разведению, полученный в данном опыте.

Условия транспортирования и хранения. Срок годности

Смотреть что такое «РНГА» в других словарях:

  • РНГА — РИГА РНГА реакция непрямой гемагглютинации мед. РНГА Словарь: С. Фадеев. Словарь сокращений современного русского языка. С. Пб.: Политехника, 1997. 527 с. РНГА русский нефтегазовый альянс энерг … Словарь сокращений и аббревиатур

  • РНГА — см. Реакция непрямой гемагглютинации … Большой медицинский словарь

  • РНГА — реакция непрямой ремагглютинации … Словарь сокращений русского языка

  • реакция непрямой гемагглютинации — (РНГА; син. реакция пассивной гемагглютинации) метод обнаружения и идентификации антигенов или антител, основанный на возникающем в их присутствии феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых были предварительно адсорбированы… … Большой медицинский словарь

  • БРЮШНОЙ ТИФ — – инфекционная болезнь из группы кишечных инфекций, характеризующаяся язвенным поражением лимфатического аппарата тонкой кишки, циклическим течением, бактериемией, симптомами интоксикации, сыпью на коже. Возбудитель – Salmonella typhi,… … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике

  • ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ — (от греч. háima — кровь и лат. agglutinatio — склеивание), склеивание и выпадение в осадок эритроцитов под воздействием бактерий, вирусов, токсинов и др., способных адсорбироваться на поверхности эритроцитов, а также гемагглютининов.… … Ветеринарный энциклопедический словарь

  • реакция непрямой гемагглютинации — РНГА Лабораторный тест с использованием эритроцитарных диагностикумов. Тематики вакцинология, иммунизация Синонимы РНГА EN… … Справочник технического переводчика

  • РИГА — РНГА реакция непрямой гемагглютинации мед. РНГА Словарь: С. Фадеев. Словарь сокращений современного русского языка. С. Пб.: Политехника, 1997. 527 с … Словарь сокращений и аббревиатур

  • Гельминтологи́ческие ме́тоды иссле́дований — Методы диагностики гельминтозов разделяют на прямые, основанные на непосредственном выявлении самих гельминтов или их фрагментов, а также личинок и яиц гельминтов (методы исследования фекалий, мочи, желчи и дуоденального содержимого, мокроты,… … Медицинская энциклопедия

  • Иммунологи́ческие ме́тоды иссле́дования — диагностические методы исследования, основанные на специфическом взаимодействии антигенов и антител. Широко используются для лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней, определения групп крови, тканевых и опухолевых антигенов,… … Медицинская энциклопедия

Реакция непрямой гемолитической агглютинации (РНГА) относится к серологическим методам исследования. Серология – наука об изучении различных свойств плазмы крови. Если точнее говорить, то серология изучает взаимодействие антител, находящихся в организме человека, с определёнными антигенами. В медицинской клинико-лабораторной диагностики серология является одним из разделов иммунологии.

Основными серологическими методами исследования являются различные реакции. Такие реакции, как правило, делятся на прямые и косвенные. В свою очередь прямые бывают двухкомпонентными – это агглютинация, гемолитическая агглютинация или реакция преципитации. А косвенные реакции в основном трехкомпонентные, к ним относятся реакции торможения гемолитической агглютинации и нейтрализации (микроорганизма и вируса).

Агглютинация представляет собой слипание и выпадения в осадок клеток, имеющих определенный антиген, который вступил во взаимодействие с таким же антигеном. Реакция преципитации помогает определить в организме или исследуемом материале неизвестный антиген путем добавления определенного антитела. В результате при положительном результате выпадает осадок в виде хлопьев.

Такие исследования проводят для определения инфекционного или бактериологического заболевания. К сожалению, такие методы не являются однозначными в диагностики данных групп заболеваний. Поэтому при постановке диагнозов следует учитывать анамнез пациента, клинические проявления заболевания, а также назначать дополнительные подтверждающие методы исследования.

Реакция непрямой гемолитической агглютинации (РНГА) – этот метод специфичен для определения инфекционных заболеваний, вызванных бактериями (например, сальмонеллезов или дизентерии), риккетсиями, простейшими или грибами. Также этот метод эффективен в отношении диагностирования сифилиса.

Принцип метода РНГА

При постановке реакции используются эритроциты (может использоваться латекс), которые имеют на своей стенке определенные антигены. К планшету с эритроцитами добавляется исследуемый материал. Если в нем имеются специфические антитела или белки определяемого возбудителя заболевания, то они вступают в связь с антигенами, слипаются и образуют видимый осадок.

Стандартный набор в основном содержит пустой планшет, эритроциты баранов, которые и имеют чувствительность к антигену выявляемого заболевания. Также в наборе присутствуют эритроциты, не имеющие антигенов. Контроли – положительный и отрицательный и стандартный реактив для разведения сывороток.

Самое главное в постановке реакции – это строгое соблюдение всех этапов. Для начала берут пустой планшет для РНГА, в лунки раскапываются последовательно заранее разведенные исследуемые образцы. В первую и последнюю лунки капают контроли. К сывороткам добавляют эритроциты со специфическими антигенами. Инкубируют планшет 2 часа.

Далее описывают визуальный результат. Он учитывается в крестах. Реакция считается верной только тогда, когда контроли прошли реакцию. Соответственно, в лунке с положительным контролем эритроциты располагаются по всему дну в виде хлопьев («зонтик»). В случае с отрицательным контролем на дне лунки выпадает маленькое четкое кольцо из эритроцитов («пуговка»).

Учет результатов

Результат учитывается по интенсивности осадка из эритроцитов в лунке.

  • «-» отрицательный результат, как отрицательный контрольный образец, в виде плотного кольца на дне без какой-либо зернистости.
  • «+» слабая интенсивность реакции, кольцо на дне в виде «пуговки», но при этом видны отдельные отложения эритроцитов. Результат описывается как «сомнительный». Обязательная пересдачи крови через 2 недели.
  • «++» средняя интенсивность прошедшей реакции. Образовавшееся кольцо на дне лунки достаточно широкое с просветом в центре. Результат трактуется как слабо положительный.
  • «+++» интенсивная реакция. В лунке эритроциты занимают всю поверхность, выпадают в виде «зонтиков». То есть с тонким кольцом по периферии. Результат оценивается как положительный.
  • «++++» резкая интенсивность реакции. Вся лунка равномерно заполнена зернистыми выпадениями эритроцитов, иногда может быть в виде «зонтика». Также результат считается положительным или резко положительным.

Реакция может быть ложноположительной при протекании в организме человека тяжелых аутоиммунных заболеваний. Поэтому, если при пересдаче анализа реакция дает перекрест и результат отчитывается как ложноположительный, незамедлительно нужно обратиться к врачу для выяснения причины данной реакции.

Иногда этот метод принимают для подтверждения другого метода диагностики, основанного также на связывании антиген-антитело, называемого иммуноферментный анализ.

Подготовка к анализу

Чтобы не допустить ложноположительных результатов, к анализу нужно подготовиться заранее. Забор крови на данный анализ производится строго натощак и без употребления утром какой-либо жидкости. Нужно воздержаться от курения, хотя бы за час до сдачи анализа. Алкогольные напитки стоит исключить из рациона как минимум за сутки до анализа. Кровь на РНГА забирается из вены.

В настоящее время реакцию непрямой (пассивной) гемолитической агглютинации очень широко используют в медицинской лабораторной диагностике. Эта методика впервые была протестирована еще в 1965 году. И до сегодняшнего дня очень востребована. Она дает возможность не только определить, протекает ли в данный момент инфекционное заболевание у человека, но и на какой стадии оно находится.

Используют РНГА чаще всего для скрининга населения на наличие инфекционных заболеваний и для подтверждения положительных результатов, например, на сифилис. Основано это на том, что тест считается достаточно чувствительным и эффективным. Но при этом реакция проста в постановке и не требует много времени, результат можно получить уже в день сдачи крови.

Cергеева Екатерина Андреевна

Своевременно проведённый анализ выявляет патологию на ранней стадии развития, что облегчает борьбу за здоровье пациента. Не каждый обыватель знает, что за анализ РПГА указан в бланках с результатами, и как его расшифровать.

Получить направление на анализ крови с аббревиатурой РПГА может любой человек, так как это распространённое исследование для людей, которым необходимо пройти медицинскую комиссию для трудоустройства либо перед операцией. Необходимо женщинам, планирующим встать на учёт по беременности.

РПГА-анализ крови: расшифровка

Лечащий врач назначает проведение анализов, в числе которых таинственная аббревиатура РПГА. Что такое РПГА в бланках анализов крови? Под этой аббревиатурой понимают особую реакцию, используемую в микробиологии и иммунологии и позволяющую выявить пассивную (непрямую) гемагглютинацию (второе обозначение анализа РНГА). Показатель выявляет возбудителей заболеваний инфекционного и венерического характера.

Внимание! Ни один анализ нельзя расценивать как 100% подтверждение диагноза. Для уточнения подозрений понадобится проведение дополнительных исследований.

Подробнее о видах анализов на сифилис можно узнать из видео ниже:

Возбудитель, обнаружение которого позволяет диагностировать поражение организма сифилисом, называется «бледная трепонема». Под его воздействием в ходе проведения анализа отмечено склеивание и выпадение эритроцитов в осадок. Такую реакцию называют агглютинацией красных кровяных телец.

Механизм определения заражения несложен. Оказавшись в здоровом организме, бледная трепонема вызывает ответную реакцию, которая выражается в выработке антител к возбудителю. Выявление присутствия антител, являющихся иммунным ответом, и будет основанием для установления диагноза. Обнаружить их наличие в организме пациента возможно на 15-30 день с момента инфицирования. По этой причине специалисты для большей достоверности результатов советуют анализировать их в динамике.

Свидетельствовать о наличии либо отсутствии бледной трепонемы в организме человека могут два типа антител:

  1. Нетрепонемный (неспецифический).
  2. Трепонемный (специфический).

РПГА-анализ относится к серологическим методам лабораторной диагностики. Впервые его применили в 1965 году, и до нынешнего времени остается широко используемым методом исследования благодаря высокой чувствительности и способности определить стадию патологии. Серологические реакции основание для установления наличия венерических заболеваний в организме. Реакция пассивной гемагглютинации относится к специфичным тестам. Тестами данного типа являются анализы:

  • ПЦР, или полимерная цепная реакция. Позволяет выявить тСПИД (синдром приобретённого иммунодефицита), ВИЧ (вирус иммунодефицита человека), уреаплазму половых органов, хламидиоз и многое другое.
  • РИФ и РИБТ-анализы. Применяются для выявления скрытого сифилиса, не проявляющегося яркой симптоматикой.
  • ИФА, или иммуноферментный анализ, позволяющий на основе изменения ферментной активности меток на антителах выявить аутоиммунные, венерологические и инфекционные заболевания.
  • Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод для подтверждения диагнозов у людей с неопределёнными или положительными результатами таких тестов как РПГА и ИФА.

К нетрепонемным видам анализов, применяемых для выявления сифилиса в комплексе с остальными тестами, относится анализ РМП.

Стадии протекания заболевания

Благодаря результатам анализа крови пациента на РПГА можно выявить наличие возбудителя патологии и установить стадию заболевания. Выделяют 4 формы поражения сифилисом:

  • латентная,
  • первичная стадия,
  • вторичная стадия,
  • третичная стадия.

Расшифровку полученных результатов проводит квалифицированный специалист, который сделает выводы на основании анализа. Для первичной стадии заболевания показателен результат, обозначаемый парой цифр 1:320 (титры реакции), достоверность исследования на данном этапе составляет 86%. Однако такие показатели могут говорить о наличии скрытого сифилиса. На следующих этапах развития патологии диагностическая точность исследования выше и достигает 100%.

В некоторых случаях возможно получение ложноположительного результата. Количество ложноположительных реакций не превышает 2,5% от общего числа лабораторных анализов, а обычно ниже. Положительный результат анализа РПГА у пациентов, не страдающих сифилисом, возможен при следующих обстоятельствах и отклонениях:

  • Наличие антител к иным возбудителям, схожим с бледной трепонемой.
  • Наблюдение ВИЧ-инфекций, гепатитов C или B.
  • При значительных травмах и обширных переломах.
  • При заболеваниях онкологического характера.
  • Системные патологии соединительной ткани.
  • Результат могут искажать некоторые заболевания (туберкулёз, брюшной тиф).

Важно! На РПГА 2 анализ крови, ИФА положительная расшифровка наблюдается на протяжении всей жизни у пациентов, переболевших сифилисом в прошлом. Данный результат анализа для бывших пациентов норма.

РПГА-анализ и другие инфекционные заболевания

Анализ крови на РПГА, расшифровка которого важна для диагностирования сифилиса, даёт возможность выявления и других инфекций. Сдавать его понадобится людям с подозрением на сальмонеллез – острая кишечная инфекция, возбудителями которой служат сальмонеллы.

При развитии заболевания у больного наблюдается интоксикация и поражение структур желудочно-кишечного тракта. В зависимости от клинической формы, в которой протекает патология, наблюдаются симптоматические проявления:

  • рвотная реакция,
  • нарушения стула (становится жидким, приобретает неприятный запах, возможно появление примесей крови или слизи),
  • болезненные ощущения в области живота,
  • повышение температуры и озноб,
  • нарушение водно-солевого баланса в организме, что отрицательно влияет на самочувствие пациента, и т.д.

Анализ с коревым маркером альтернатива для диагностирования кори, вызывающей поражения слизистой зрительных органов, дыхательных путей и полости рта. Патологии сопутствует тяжёлая интоксикация и сыпь на кожных покровах больного.

Метод РПГА-исследования позволяет выявить антитела против возбудителя столбняка. Столбняк – острая инфекционная патология, возбудитель которой может попасть в организм при нарушении целостности кожных покровов и слизистых оболочек, использовании нестерильных материалов в медицинских учреждениях и т.д.

Клиническими признаками заболевания являются симптомы:

  • Повышенный тонус мышц (ригидность).
  • Ухудшение общего состояния, недомогание и повышенная раздражительность, ухудшение аппетита.
  • Судороги лицевых мышечных тканей.
  • Боль тянущего характера вокруг места поражения.
  • Угнетение глотательной функции.

РПГА, ПЦР и ИФА-тесты используются на разных этапах коклюша при диагностировании. При этом заболевании на начальной стадии зачастую отсутствуют прямые симптомы, что отодвигает по времени возникновение подозрений на инфицирование.

Температурные показатели организма могут меняться, но способны оставаться и на нормальном уровне. Со временем появляется кашель, который позже приобретает приступообразный и спазматический характер.

Подготовка к сдаче анализа и порядок проведения

Для проведения анализа у пациента будет взят образец крови из вены. Чтобы в полученных результатах не возникало сомнений, врач дает рекомендации:

  • Сдавать анализ на голодный желудок, процедура проходит в утреннее время, что позволяет добиться 8 часов с момента последнего приёма пищи.
  • Желательно не курить за несколько часов до забора материала для анализа.
  • Употребление спиртных напитков исключить.
  • При употреблении медицинских препаратов предупредить лечащего врача, который даёт направление на анализ.

Следование этим несложным рекомендациям позволит минимизировать риск искажения результатов исследования.

Проведения РПГА-исследования не стоит бояться или стесняться. Ведь анализ назначается людям с явными признаками венерических заболеваний и при бытовой необходимости. Список показаний к обследованию обширен:

  • Полное обследование необходимое условие перед проведением хирургических операций.
  • Перед госпитализацией на стационарное лечение.
  • Обязательно для людей, желающих стать донорами.
  • Входит в список обследований, необходимых для оформления санитарных книжек и трудоустройства.
  • При наличии случаев прямого контакта с заражёнными людьми.
  • В случае подозрений на такие заболевания, как корь, сальмонеллез, дифтерия, столбняк, коклюш и многие другие.
  • При обнаружении характерной симптоматики сифилиса (увеличение лимфоузлов, высыпания язвенного типа и т.д.).

Анализ РПГА относится к широко используемым методам диагностики бактериологических патологий. При обращении к квалифицированному специалисту можно быть уверенным в своевременном определении заболевания и его успешном лечении. Будьте здоровы!

Видео об анализе РПГА:


Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Серологический анализ крови представляет собой способ лабораторного исследования определенных антигенов или антител (специфических белков) в сыворотке крови пациента, основанный на иммунных реакциях организма. Данный метод применяется при диагностике инфекционных заболеваний для выявления наличия антител в крови больного к определенному виду вирусов или бактерий, а также для определения групповой принадлежности крови.

Исследуемый материал

В первую очередь для проведения серологического анализа используют биологический материал, собранный от пациента:

  • сыворотка крови
  • слюна
  • фекальные массы

В некоторых случаях исследуется материал, выделенный из определённых объектов окружающей среды:

  • вода
  • почва

Методика проведения анализа или забора крови

Данный анализ не требует специальной подготовки пациента. Забор крови проводится утром натощак и, производится в процедурных кабинетах лечебных учреждений, согласно общепринятым гематологическим методикам. Для серологического исследования забор крови производится двумя методами: венозную кровь забирают из локтевой вены пациента, а капиллярную кровь – из безымянного пальца. Кровь помещают в стерильные герметичные пробирки.

Особенности транспортировки крови и хранения сыворотки

Сразу же после забора крови её транспортируют в специальную лабораторию, где в тот же день производится подготовка сыворотки. Хранение сыворотки допускается не более 4 – 6 дней в холодильной камере при температуре 2 – 4 градусов. При необходимости более длительного хранения, сыворотка замораживается. Во избежание нарушения качества сыворотки допускается однократное её замораживание и, соответственно, размораживание. При длительном хранении антитела теряют свои свойства и становятся частично неактивными, наиболее чувствительными к замораживанию являются иммуноглобулины класса М. После размораживания сыворотки необходимо тщательное перемешивание её до однородной массы, что способствует восстановлению концентрации антител, содержащихся в данной сыворотке.

Для чего используют серологические исследования?

Серологические методы лабораторной диагностики используются для выявления таких заболеваний как эхинококкоз, трихинеллёз, токсокароз, описторхоз, цистицеркоз, токсоплазмоз, амебиаз, лямблиоз, для определения эффективности проведённого курса лечения и, наконец, для обнаружения повторного заболевания после полного выздоровления пациента.

Основные методы серологической диагностики

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Данная реакция является непрямым вариантом серологического исследования, то есть, производится она в два этапа. На первом этапе производят выявление необходимого антитела в циркулирующем комплексе антиген – антитело с помощью антиглобулина, схожего по своей структуре с белками иммунной сыворотки. Выявление искомого антитела возможно также при изучении заранее приготовленного антигенного препарата под люминесцентным микроскопом, без использования антиглобулинов.
Иммунофлюоресцентная реакция – очень трудоёмкий процесс, требующий от специалиста немало времени и ответственности. Начинается реакция с подготовки растворов, затем сыворотки и их контрольные образцы подвергаются титрованию (процесс, позволяющий определить содержание определённого вещества путём постепенного смешивания исследуемого раствора с контролируемым количеством реагента). Подготовленные ранее разведения и их контрольные образцы аккуратно наносятся на предметные стёкла с антигеном. Потом препараты подвергаются инкубации, затем следует их отмывание и высушивание на воздухе. На стёкла с антигеном тонким слоем наносится антисыворотка, после этого производится вторичная инкубация препаратов и, вся предыдущая цепь действий повторяется, завершаясь высушиванием препарата. В результате препарат на предметном стекле подвергается обработке глицерином и исследуется в люминесцентном микроскопе.
Результаты проведённой реакции оцениваются по четырёх бальной шкале, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов:
+ очень слабое свечение клетки, заметное только на её периферии
++ слабое свечение периферии клетки, но с явно заметным зелёным оттенком
+++/++++ яркое свечение зелёного цвета периферии клетки
Титром реакции считается такое разведение сыворотки, где не менее 50 % клеток антигена проявляют чёткое поверхностное свечение, то есть результат реакции +++ или ++++. Значение тира реакции от 1/80 до 1/100.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

Принцип реакции основывается на способности эритроцитов концентрировать антиген на своей поверхности и склеиваться, образуя видимый осадок, при вступлении в контакт со специфическими антителами. Данная реакция очень информативна в диагностике острой формы описторхоза, острой и хронической формы эхинококкоза и трихинеллёза. Иногда РНГА используется для подтверждения результатов ИФА, что помогает повысить достоверность диагностики паразитарных заболеваний. Набор, необходимый для проведения реакции, содержит: (Д+) эритроциты барана, чувствительные к специфическому антигену, (Д-) эритроциты без антигена, (Э) сухие эритроциты барана, (К+) диагностическую агглютинирующую сыворотку – положительный контрольный тест, (К-) нормальная сыворотка человека – отрицательный тест, реагент, применяемый для подготовки раствора, используемого при разведении сыворотки. Постановка реакции происходит в несколько этапов, строго следующих один за другим. Вначале подготавливают необходимые растворы, затем готовят сыворотки и их контрольные образцы, после чего данные образцы наносятся на планшеты. Далее следует нанесение на планшеты сенсибилизированных (Д+) и несенсибилизированных (Д-) эритроцитов барана. Данные препараты инкубируются, и через некоторое время производится учёт результатов. Результаты проведённой реакции учитываются по четырёх бальной системе.
Интенсивность реакции зависит от количества осаждённых эритроцитов на дне образованных лунок:
– отрицательная реакция, которая характеризуется осаждением эритроцитов на дно лунок в виде небольшого колечка с гладкими краями или «пуговки»
+ слабая интенсивность, для данной реакции характерны небольшие одиночные отложения на дне лунки. Неагглютинированные эритроциты образовывают «маленькое колечко» в центре лунки
++ средняя интенсивность, ей свойственно образование на дне лунки «широкого плотного кольца» из неагглютинированных эритроцитов
+++ интенсивная реакция, агглютинированные эритроциты образуют так называемые «зонтики», в центре которых, явно видны кольца, образованные осевшими неагглютинированными эритроцитами
++++ резко интенсивная реакция, в которой агглютинируются все эритроциты и, образуя «зонтики», выстилают дно лунок.
Титром данной реакции считают последнее разведение сыворотки, при котором выявляется явная агглютинация эритроцитов не менее +++, то есть при интенсивной или резко интенсивной реакции.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Принцип метода заключается в своеобразном взаимодействии антитела с антигеном. Одним из обязательных условий реакции является предварительная фиксация одного из её компонентов, то есть антигена или антитела, на твёрдых планшетах. Затем, при помощи ферментной метки обнаруживают возникнувшие комплексы антиген – антитело благодаря изменению оптической плотности первоначальной смеси (субстрата), что проявляется изменением интенсивности её окраски. ИФА свойственны некоторые преимущества перед остальными серологическими методами, например, данная реакция является наиболее чувствительной, в тестах используются универсальные реагенты, остающиеся стабильными не менее 6 месяцев, автоматизированный процесс учёта результатов реакции. Набор, необходимый для проведения реакции, содержит следующие компоненты: паразитарный антиген, специфические сывороточные антитела, конъюгат, планшета с зафиксированным на ней специфическим паразитарным антигеном, контрольные сыворотки.
Постановка реакции ИФА происходит в несколько этапов: вначале производится приготовление необходимых растворов, затем готовятся исследуемые образцы сывороток, а также контрольные сыворотки, позже следует нанесение приготовленных образцов сыворотки и контрольных сывороток на твёрдофазные носители, планшеты инкубируются, промываются и, только после проведённых процедур в лунки планшет вносится конъюгат. Через некоторое время он удаляется путём промывания лунок. На завершающем этапе в лунки вносится субстратная смесь и выдерживается в тёмном месте при комнатной температуре. Оценка результатов проводится автоматически при помощи специальных измерительных приборов, в некоторых случаях допускается визуальный учёт результатов проведённой реакции.
Достоверность и качество методов серологической диагностики зависят от организации проведённого внутреннего и внешнего лабораторного контроля, состоящих из нескольких независимых процедур, предназначенных для оценки качества результатов проведённого анализа.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *